Spectral flow cytometry unit

L’Unità di Citometria Spettrale a Flusso dell’INGM mette a disposizione tecnologie all’avanguardia per l’analisi multiparametrica di cellule singole, supportando progetti di ricerca di base e traslazionale. L’Unità offre supporto scientifico lungo l’intero percorso sperimentale, dalla progettazione dello studio e dall’ottimizzazione dei pannelli per citometria spettrale fino all’analisi computazionale dei dati e alla loro interpretazione biologica. Vanta una consolidata esperienza nell’immunofenotipizzazione di diverse popolazioni cellulari, nella progettazione di pannelli complessi per citometria spettrale e nell’identificazione di firme di autofluorescenza associate a specifiche popolazioni cellular. Dispone inoltre di competenze avanzate nella caratterizzazione delle vescicole extracellulari e fornisce supporto scientifico per lo sviluppo e l’ottimizzazione di metodologie innovative di citometria a flusso.

Strumentazione

Citometro spettrale Cytek Aurora Evo

L’Unità è dotata di un Cytek Aurora Evo equipaggiato con cinque laser (355, 405, 488, 561 e 640 nm) e tecnologia di acquisizione Full Spectrum. Lo strumento acquisisce l’intero spettro di emissione di ciascun fluorocromo, consentendo analisi ad alta dimensionalità con oltre 40 parametri fluorescenti simultaneamente e migliorando la risoluzione di pannelli multicolore altamente complessi.

Lo strumento consente di eseguire:

  • Immunofenotipizzazione ad alta dimensionalità
  • Spectral unmixing completo
  • Estrazione di molteplici profili di autofluorescenza
  • Identificazione di popolazioni cellulari rare
  • Analisi di particelle di piccole dimensioni mediante modulo SPF ad alta risoluzione

Competenze tecnologiche

  • Immunofenotipizzazione ad alta dimensionalità.
  • Progettazione e ottimizzazione di pannelli spettrali.
  • Saggi di metabolismo cellulare mediante citometria a flusso.
  • Studio e ottimizzazione del comportamento spettrale dei fluorocromi.
  • Ottimizzazione strumentale per la rilevazione e caratterizzazione di nanoparticelle, incluse le vescicole extracellulari.
  • Analisi computazionale avanzata mediante algoritmi quali UMAP, FlowSOM, Phenograph e approcci correlati.

Competenze scientifiche

L’Unità di Citometria Spettrale a Flusso offre non solo un servizio tecnologico, ma anche un supporto scientifico qualificato per progetti di ricerca collaborativa.

L’Unità vanta una consolidata esperienza nel campo dell’immunologia, con particolare attenzione all’immunologia dei tumori, alle malattie cardiovascolari, al monitoraggio della risposta immunitaria e alla caratterizzazione funzionale delle cellule del sistema immunitario. Supporta studi su campioni umani e modelli murini preclinici. Dispone inoltre di competenze specifiche nello studio delle vescicole extracellulari come biomarcatori circolanti, comprendendo lo sviluppo di saggi, l’ottimizzazione metodologica e l’applicazione della citometria spettrale agli approcci di biopsia liquida.

Servizi

  • Supporto in progettazione sperimentale
  • Disegno e ottimizzazione di pannelli spettrali
  • Selezione di anticorpi e fluorocromi
  • Spectral unmixing
  • Analisi computazionale dei dati
  • Formazione e supporto tecnico

Team

Nome / Name Ruolo / Role Email
Achille Anselmo PhD Head anselmo@ingm.org
Daniele Pastorelli PhD Staff Scientist pastorelli@ingm.org

Pubblicazioni

  • Vitiello PP, Rousseau B, Chilà R, Battuello P, Amodio V, Battaglieri V, Grasso G, Scardellato S, Anselmo A, Clemente F, Rospo G, Lamba S, Bartolini A, Pisati F, Tripodo C, Congiusta N, Russo M, Crisafulli G, Di Nicolantonio F, Germano G, Diaz LA Jr, Bardelli A. Cisplatin and temozolomide combinatorial treatment triggers hypermutability and immune surveillance in experimental cancer models. Cancer Cell. 2025 Jul 14;43(7)
  • Boselli D, Clemente F, Di Terlizzi S, Pagiatakis C, Papa L, Del Zotto G, Villa C, Ramirez GA, Maugeri N, Manfredi AA, Anselmo A. Unravelling Plasma Extracellular Vesicle Diversity With Optimised Spectral Flow Cytometry. J Extracell Biol. 2025 Apr 25;4(4).
  • Faccani C, Rotta G, Clemente F, Fedeli M, Abbati D, Manfredi F, Potenza A, Anselmo A, Pedica F, Fiorentini G, Villa C, Protti MP, Doglioni C, Aldrighetti L, Bonini C, Casorati G, Dellabona P, De Lalla C. Workflow for high-dimensional flow cytometry analysis of T cells from tumor metastases. Life Sci Alliance. 2022 Jun 3;5(10)
  • Anselmo A, Frank D, Papa L, Viviani Anselmi C, Di Pasquale E, Mazzola M, Panico C, Clemente F, Soldani C, Pagiatakis C, Hinkel R, Thalmann R, Kozlik-Feldmann R, Miragoli M, Carullo P, Vacchiano M, Chaves-Sanjuan A, Santo N, Losi MA, Ferrari MC, Puca AA, Christiansen V, Seoudy H, Freitag-Wolf S, Frey N, Dempfle A, Mercola M, Esposito G, Briguori C, Kupatt C, Condorelli G. Myocardial hypoxic stress mediates functional cardiac extracellular vesicle release. Eur Heart J. 2021 Jul 21;42(28):2780-2792.
  • Donadon M, Torzilli G, Cortese N, Soldani C, Di Tommaso L, Franceschini B, Carriero R, Barbagallo M, Rigamonti A, Anselmo A, Colombo FS, Maggi G, Lleo A, Cibella J, Peano C, Kunderfranco P, Roncalli M, Mantovani A, Marchesi F. Macrophage morphology correlates with single-cell diversity and prognosis in colorectal liver metastasis. J Exp Med. 2020 Nov 2;217(11):e20191847.
  • Galletti G, De Simone G, Mazza EMC, Puccio S, Mezzanotte C, Bi TM, Davydov AN, Metsger M, Scamardella E, Alvisi G, De Paoli F, Zanon V, Scarpa A, Camisa B, Colombo FS, Anselmo A, Peano C, Polletti S, Mavilio D, Gattinoni L, Boi SK, Youngblood BA, Jones RE, Baird DM, Gostick E, Llewellyn-Lacey S, Ladell K, Price DA, Chudakov DM, Newell EW, Casucci M, Lugli E. Two subsets of stem-like CD8 + memory T cell progenitors with distinct fate commitments in humans. Nat Immunol. 2020 Dec;21(12):1552-1562.
  • Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, Acs A, Adam D, Adam-Klages S, Agace W, Aghaeepour N, Akdis M, Allez M, Almeida LN, Alvisi G, Anderson G, Andrä I, Annunziato F, Anselmo A, et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies (second edition). Eur J Immunol. 2019 Oct;49(10):1457-1973.
  • Veronica Larcher, Paolo Kunderfranco, Marco Vacchiano, Pierluigi Carullo, Marco Erreni, Irene Salamon, Federico Simone Colombo, Enrico Lugli, Marta Mazzola, Achille Anselmo* and Gianluigi Condorelli*. An autofluorescence-based method for the isolation of highly purified ventricular cardiomyocytes. Cardiovasc Res. 2018 Mar 1;114(3):409-416. *The authors are equally contributed
  • Anselmo A, Riva F, Gentile S, Soldani C, Barbagallo M, Mazzon C, Feruglio F, Polentarutti N, Somma P, Carullo P, Angelini C, Bacci M, Mendolicchio GL, Voza A, Nebuloni M, Mantovani A, Garlanda C. Expression and function of IL-1R8 (TIR8/SIGIRR): a regulatory member of the IL-1 receptor family in platelets. Cardiovasc Res. 2016; 111, 373–384
  • Anselmo A, Mazzon C, Borroni EM, Bonecchi R, Graham GJ, Locati M. Flow cytometry applications for the analysis of chemokine receptor expression and function. Cytometry A. 2014 Apr;85(4):292-301

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